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２．免疫細胞化学

　免疫細胞化学は標的蛋白質の細胞内局在を明らかにする方法で、免疫組織化学から発展的に開発された。原理的には抗原抗体反応を利用して蛋白質を標識する。後に述べるfreeze replica法とともに20世紀の細胞生物学発展に寄与した方法である。電子顕微鏡下で観察するためには電子線を散乱させ十分なコントラストが得られることが必要であるが、同時に観察に耐えるだけの増幅的標識が必要と考えられた。そのため、1970〜1980年代にかけては抗体を検出するためのプローブとして酵素が使用された。いわゆる酵素抗体法である。この方法は前包埋標識（pre-embedding）を採用しており、Horse radish peroxidaseで標識された二次抗体を用いて、一次抗体を検出するのが一般的である。これはdiaminobenzidineを基質として、二次抗体の存在場所のコントラストを上げ、一次抗体並びに標的蛋白質の局在を明らかにしようとする技法である。しかし、前包埋で組織塊のまま標識するため細胞内への抗体の浸透が不均一であるとともに酵素反応により標識の電子密度（コントラスト）を上げるため結果的に細胞内微細構造の保存が悪くなる。また標識の酵素的増幅作用が蛋白質の局在箇所をかえって不正確にするという欠点もあり、最近では一般的でなくなった。1980年にJurgen Rothが金コロイドProtein Aをプローブとして、一次抗体を検出する方法を開発してからは金コロイド標識が主流となった。さらに金コロイド標識の二次抗体が市販されるようになり、一次抗体検出の特異性が高まったため、現在ではこの金コロイド二次抗体を使用して標識するのが一般的である。また、Lowicryl K4Mのような水溶性樹脂が開発されてからは抗体の組織内への浸透を心配する 必要のない後包埋（post embedding）法が主流である。ここではこのLowicryl K4Mに包埋された組織の切片を金コロイド付着抗体で標的蛋白質を免疫標識する方法を詳述する。
　免疫標識は超薄切片法に適用されるだけではなく現在ではfreeze etching法にも適用され新しい構造細胞生物学を切り開きつつある。このことについてはそれぞれの技法を紹介するところで改めて詳述する。（図1）は免疫標識がどのような電顕技法と結びつけられるかを示したチャートである。

	図1：免疫細胞化学のフローチャート　この章では赤字で書かれた部分を解説する。

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