構造細胞生物学のための電子顕微鏡技術：日立ハイテク

構造細胞生物学のための電子顕微鏡技術

臼倉先生に電子顕微鏡技術のお話しをしていただきました。

序言

1.基礎技術としての超薄切片法
	（1）固定の意義
	（2）一般的な化学固定法と実践技術
	-緩衝液、固体液の作り方
	-固定の方法：環流固定と浸漬固定
	（3）脱水と包埋
	-脱水
	-包埋
	（4）重合
	（5）トリミングと薄切
	-面合わせ
	-semi-thin sectionによる観察
	-グリッド処理と切片採取
	-培養細胞の超薄切片法

2.免疫細胞化学
	（1）免疫細胞化学の固定と包埋過程
	-Lowicryl K4M樹脂を作るための混合比
	-低温脱水、包埋の薦め
	（2）免疫標識の実践技術
	（3）光学顕微鏡による免疫組織化学との連続性
	-電顕用樹脂切片を用いたレーザー顕微鏡免疫組織化学

3.急速凍結法
	（1）冷却金属圧着凍結
	-試料台への試料の載せ方
	-凍結試料の保存
	（2）免疫標識の実践技術
	-試料台への試料の載せ方
	-注意すべき点
	（3）光学顕微鏡による免疫組織化学との連続性

4.凍結置換法（freeze substitution）
	（1）凍結置換（freeze substitution）
	（2）培養細胞の凍結置換
	（3）凍結置換と免疫細胞化学

5.フリーズレプリカ法
	（1）フリーズレプリカ法（凍結割断レプリカ法）
	-フリーズフラクチャー（レプリカ）法の実際
	-急速凍結試料のフリーズフラクチャー、フリーズエッチング法
	（2）免疫フリーズフラクチャー

6.細胞膜剥離法（unroofing）
	（1）超音波による細胞膜剥離（unroofing）
	（2）接着による細胞膜剥離

7.新世代フリーズエッチングレプリカ法
	（1）膜剥離フリーズエッチングレプリカ（unroofing freeze-etching replica）法
	（2）免疫フリーズエッチングレプリカ法

8.単離した分子を見る
	（1）ネガティブ染色（negative staining、負染色）
	（2）低角度回転蒸着法（low angle rotary shadowing）
	-グリセリン法
	（3）マイカフレーク法

9.凍結乾燥法

10.クライオ電子顕微鏡法（Cryo-electron microscopy）
	（1）精製蛋白質の氷包埋法
	（2）細胞の氷包埋

11.電子分光結像法

12.デジタル写真処理
	（1）画像のデジタル化
	（2）ステレオアナグリフ（stereo anaglyph）の作成法
	-RGステレオアナグリフ
	-RGBステレオアナグリフ

13.電子顕微鏡トモグラフィー：トモグラフィーによる立体再構築
	（1）蛋白質分子レベル
	（2）細胞レベル
	-膜裏打ち構造について
	（3）トモグラフィーの実際
	（4）EELS Imagingとトモグラフィー
	（5）プレゼンテーションとトモグラフィー

14.電子顕微鏡観察のための細胞培養法

15.凍結超薄切片法
	（1）免疫凍結超薄切片法
	-免疫標識
	（2）構造解析を目指した新世代凍結切片法
	-凍結切片トモグラフィーの画像の信頼性と分解能

16.電子顕微鏡の原理
	（1）電子顕微鏡と光学顕微鏡：像形成における類似と相違
	（2）照明（照射）系について
	（3）結像の原理と分解能
	（4）画像記録と有効倍率

執筆者：
名古屋大学エコトピア科学研究所融合プロジェクト部門（先端技術共同研究施設）
教授　臼倉治郎先生
東京大学において山田英智教授（現名誉教授）のもとで凍結技法を用いた細胞生物学を学んで以来、凍結技法のパイオニアとして急速凍結装置、分子蒸留凍結乾燥装置、フリーズエッチング装置などを開発。現在も日本生物物理学会、日本顕微鏡学会、米国細胞生物学会など12の学会に所属し、凍結技法を中心としたバイオイメージングの分野で世界的に活躍している。1994年度　日本電子顕微鏡学会賞（瀬藤賞）受賞。

臼倉先生のホームページ

「エコトピア材料工学講座バイオイメージング」